蓝光切胶仪通过LED蓝光(波长通常为470nm左右)激发凝胶中染色的核酸或蛋白质条带,使其发出荧光以便观察。与传统的紫外透射仪相比,蓝光具有更高的安全性(不损伤DNA/RNA),同时兼容多种染色剂(如EB替代染料、SYBR Green等)。部分仪器采用侧面或底部光源设计,通过滤光片过滤杂光,提供均匀的蓝色背景照明,使条带清晰可见。
蓝光切胶仪的操作要点:
1.染色选择:优先选用低毒或无毒荧光染料(如GelRed、SYBR Safe),避免使用高浓度EB,以减少污染风险。
2.光源调节:根据凝胶厚度和荧光强度调整光强,过亮可能导致条带过曝,过暗则影响观察。
3.切割技巧:使用专用清洁刀具(如灭菌刀片或手术刀),在蓝光下快速切入凝胶,尽量减少拖拽以免破坏条带完整性。
4.防护措施:虽然蓝光无害,但长时间直视可能引起视觉疲劳,建议佩戴护目镜并缩短单次观察时间。
5.设备维护:定期清洁透光面板,避免染料残留影响观察效果;长期停用时需切断电源。
蓝光切胶仪的测定步骤:
1.准备胶样:将待分离的蛋白质样品通过电泳在琼脂糖凝胶上进行分离,分离完毕后,将胶样放置在透明塑料薄膜上,并将其切割成需要的大小。
2.操作设置:打开,并按照仪器说明书设置相应的波长和电压。
3.进样:将切割好的胶样放入切胶仪中,确保胶样与光源保持适当距离,以便观察荧光。
4.观察与记录:在蓝光照射下,观察胶样中的荧光条带,使用相机或手机拍摄记录所需条带的位置和大小。
5.切胶:根据记录的信息,使用专用切胶工具从凝胶中切取目标条带,注意避免污染和损伤其他部分。
6.后续处理:将切取的胶条进行进一步的纯化、分析或其他实验操作。